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實驗中免疫組化結(jié)果評判的三種方法
點擊次數(shù):6068 更新時間:2021-08-11

      免疫組織化學(xué)(Immunohistochemistry)又稱免疫細胞化學(xué),是根據(jù)抗原抗體反應(yīng)和化學(xué)顯色原理,組織切片或細胞標(biāo)本中的抗原和一抗結(jié)合,再利用一抗與標(biāo)記生物素的二抗進行反應(yīng),前者再用標(biāo)記辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶(AKP)等的抗生物素(如鏈霉親和素)結(jié)合,最后通過呈色反應(yīng)在光學(xué)顯微鏡下可清晰看見細胞內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)物,從而原位確定特定蛋白質(zhì)的分布和含量。免疫組化,是應(yīng)用免疫學(xué)基本原理——抗原抗體反應(yīng),即抗原與抗體特異性結(jié)合的原理,通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑(熒光素、酶、金屬離子、同位素)顯色來確定組織細胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì)),對其進行定位、定性及相對定量的研究。想要在做完實驗評判結(jié)果,現(xiàn)教您三種方法,簡單易學(xué),方便快捷,一起來看看吧!

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(1)陽性著色細胞計數(shù)法

在40光鏡下,隨機選擇不重疊的10個視野,人工或機器計數(shù)陽性著色細胞,每組3~6張不同動物組織切片,然后進行組間比較即可。

(2)灰密度分析法

通過在不同組別和不同動物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進行灰密度分析,然后進行統(tǒng)計分析即可。

(3)評分法

通過在光學(xué)顯微鏡下對組織切片分別按染色程度(0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色)、陽性范圍進行評分(1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%),終了時可以分?jǐn)?shù)相加,再進行比較。

對于以上這幾種方法,各有利弊,請細心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是您要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。

   



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